Cq值qPCR中的关键指标及其影响因素

Cq值，也称为循环阈值，是定量PCR中关键指标。它表示样品反应超过荧光阈值的循环数，表明目标核酸的检测结果。Cq值越低表示目标序列初始量越大。影响Cq值大小的因素有很多，实验过程中需要控制这些因素保证Cq值的准确性和真实性。

Cq值的不同术语：Cq – quantification cycle（量化循环数）

以上这些词都是表示的Cq值，只是名称不同而已。为了标准化qPCR命名法，MIQE（minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments）指南建议使用Cq值。这个指南将关于qPCR的实验和报告标准化，这一点至关重要，因为qPCR被用于分析临床样本和诊断轻度和重度疾病，尤其是 SARS-CoV-2感染，对结果判定的客观准确要求极高。

什么是Cq值？Real-time PCR （或qPCR）通常用于量化目标序列的绝对量或比较样本之间目标序列的相对量。该技术通过实时监测在扩增放大过程中目标特异性荧光信号的变化来展示扩增情况。虽然qPCR的荧光染料和探针是序列特异性的，但是大多数qPCR实验中都会出现相当多的背景荧光值。想要获得具有实际意义的目标序列真实情况，就需要排除掉背景荧光信号的影响。这个通过qPCR中的两个值来解决：阈值线和Cq值。阈值线是检测反应高于背景荧光强度的基线。在进行qPCR之前，在qPCR仪上设置或者默认的一个阈值水平。示意图中的灰色虚线即为阈值线，表示高于背景荧光信号的基线，也在指数阶段开始时与反应曲线相交（图1）。

图1. 阈值线（灰色虚线）和Cq值在qPCR反应曲线中的应用。Cq值是样本的反应曲线与阈值线之间的循环数。

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